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《西部林業(yè)科學(xué)雜志》2015年第一期

1材料與方法

1.1研究地概況(1)永仁縣油橄欖示范種植基地試驗地地處永仁縣城南部8km處，屬永定鎮(zhèn)糯達(dá)村，地理位置為北緯26°02''''26″，東經(jīng)101°38''''50″，海拔1650m。該樣地屬于亞熱帶季風(fēng)氣候，年均氣溫17.5℃，平均年溫差13.7℃，無霜期267天，年平均降雨量868.4mm。該區(qū)域?qū)儆谥袊烷蠙旆N植區(qū)劃中的一級適生區(qū)［20］。(2)麗江市玉龍縣大具鄉(xiāng)大具鄉(xiāng)位于麗江市玉龍縣東北角、玉龍雪山腳下，地理位置為北緯27°16''''，東經(jīng)100°16''''，海拔1730m，全縣年均溫17℃，最高溫33.7℃，最低溫0℃;年降雨量600～900mm，霜期30天左右，立體氣候明顯，具有較為獨特的自然條件和氣候條件。由于處于雪山冰川和金沙江的干熱河谷區(qū)，大具鄉(xiāng)土壤類型豐富，有棕壤、黃棕壤、紅壤、水稻土、石灰?guī)r土等土類，土質(zhì)疏松，所研究的油橄欖種植示范園位于大具鄉(xiāng)東北部培良村［21］。(3)昆明樹木園昆明樹木園地理位置為北緯25°08''''，東經(jīng)102°45''''，海拔1950～2045m，處亞熱帶半濕潤高原季風(fēng)氣候區(qū)。年平均氣溫14.7℃，絕對最低溫－9℃，絕對最高溫31.5℃，≥10℃積溫4799.3℃，年均降雨量700～1100mm，年平均相對濕度68.2%，年日照時間2239.3h。

1.2樣品的采集2013年4～6月分別在永仁、麗江和昆明的油橄欖種植園采集研究樣品，每一個樣地隨機(jī)選取9株油橄欖植株進(jìn)行采樣研究，3個研究點的油橄欖均為2009年定植，到采樣時為4年生的油橄欖植株。采集5～30cm土層的油橄欖根系樣品以及根際土壤樣品。樣品置于紙袋中，帶回實驗室后，根樣置于－70℃保存，根際土樣經(jīng)自然風(fēng)干后置于冰箱4℃保存，并在3個月內(nèi)處理完畢。

1.3油橄欖根樣的處理根樣在堿解離-酸性品紅染色法的基礎(chǔ)上，稍做調(diào)整后(以英雄牌純藍(lán)墨水作為染色劑)進(jìn)行處理和制片。按照McGonigle等的十字交叉法，于光學(xué)顯微鏡(OlympusBH-2，Japan)下觀察AMF在各根樣中的定殖情況。典型的標(biāo)本于顯微鏡(Nikon80i，Japan)下拍照保存圖片。

1.4土樣的處理

1.4.1土壤的理化性質(zhì)測定按Tan等描述的方法對3個樣地土壤的理化性質(zhì)進(jìn)行測定，每一栽培區(qū)的土壤測定3個重復(fù)樣品。具體測定指標(biāo)包括全氮、全磷、全鉀、速效氮、速效磷、速效鉀、有機(jī)質(zhì)含量和pH值。

1.4.2土壤中AMF孢子的分離與鑒定每一風(fēng)干土樣稱取20g，采用濕篩傾析法［25］分離AMF孢子和孢子果，并在體視顯微鏡下對完整、健康的孢子和孢子果進(jìn)行計數(shù)。將濕篩得到并計數(shù)后的孢子或孢子果按顏色、大小、形狀等特征進(jìn)行初步分類后，同類型的孢子或孢子果分別放于載玻片上含PVA或PVA+Melzer’s試劑的浮載劑中，加蓋玻片制成標(biāo)本片后于光學(xué)顯微鏡下觀察孢子和孢子果的顏色、連孢菌絲的特征，測定孢子的大小;然后將孢子壓破后再觀察孢子和孢子果的顏色、大小、形狀、包被、孢子在孢子果中的排列方式;孢壁的顏色、厚度、分層分組情況、各層壁的質(zhì)地類型;孢子內(nèi)含物的性質(zhì)、孢子表面飾物以及在Melzer’s試劑中的顏色反應(yīng);連孢菌絲的顏色、數(shù)目、形狀、厚度及連點直徑及與孢子的連接情況等形態(tài)學(xué)特征。綜合以上觀察結(jié)果，根據(jù)Schenck＆Pérez等［26］的《VA菌根真菌鑒定手冊》及國際VA菌種保藏中心(InternationalCultureCollectionofVesicularandArbuscularMycorrhizalFungi，IN-VAM)在Internet上提供的種的描述及圖片，同時參閱相關(guān)的原始發(fā)表文獻(xiàn)和近年來發(fā)表的新種的文獻(xiàn)資料進(jìn)行AMF種的鑒定。對有代表性或特征明顯的孢子和孢子果進(jìn)行拍照(Nikon80i，Japan)。

2結(jié)果與分析

2.13個不同栽培區(qū)油橄欖種植園的土壤化學(xué)性質(zhì)3個油橄欖種植園的土壤化學(xué)性質(zhì)見表1。由表1可知，3個栽培點的土壤中的營養(yǎng)元素含量差別顯著，速效磷、全磷、水解氮、全氮、速效鉀、全鉀和有機(jī)質(zhì)等均是永仁種植園的最高，昆明栽培點除全磷含量略低于麗江以外，其余幾個養(yǎng)分指標(biāo)均高于麗江點;土壤pH值麗江和昆明的接近中性，永仁土壤偏酸性。

2.2云南3個栽培區(qū)油橄欖根系中AMF的定殖情況從永仁、麗江和昆明3個油橄欖種植園中采集的4年生油橄欖植株根系中都檢測到了AMF的定殖，且全部根系樣品中都觀察到了AMF的典型結(jié)構(gòu)，即菌絲、菌絲圈、叢枝和泡囊。油橄欖根系中AMF的總定殖率從高到低的順序是昆明、麗江和永仁，兩兩之間的差異達(dá)到顯著水平(p＜0.05)。方差分析結(jié)果表明，不同栽培地點之間除泡囊外，另外3種AMF的典型結(jié)構(gòu)即菌絲、菌絲圈和叢枝的定殖率在不同的栽培地點之間存在顯著的差異。本項研究發(fā)現(xiàn)，在3個栽培區(qū)種植的油橄欖植株根系均有AMF定殖，這與國外眾多的研究相吻合，油橄欖是一個典型的叢枝菌根營養(yǎng)型樹種。不同栽培點之間，油橄欖植株根系中AMF的定殖程度各不相同，AMF在植物根系中的定殖受到宿主植物種類以及生態(tài)條件等多種因素的影響［27］。在本項研究中，盡管三地都是2009年栽培的油橄欖植株，但是氣候土壤和立地條件等方面的差異，都影響著該類真菌在根系中的定殖程度。

2.3云南3個油橄欖栽培區(qū)土壤中AMF孢子密度和種類組成由表2可知，AMF孢子密度在3個樣點之間存在顯著差異，最高的是麗江，其次是昆明，永仁樣地的土壤孢子密度最低。對比3個樣地的土壤營養(yǎng)元素的含量，可知，永仁栽培點土壤中所測定的各種營養(yǎng)元素的含量均顯著高于另外兩個栽培點，土壤理化性質(zhì)是顯著影響AMF孢子種類組成的重要因子［28］，特別是高磷的土壤環(huán)境會導(dǎo)致植物根系細(xì)胞膜物質(zhì)交換的減少以及根系分泌物量的下降，限制了宿主根部與AM真菌的營養(yǎng)交換，抑制AM真菌的生長、發(fā)育和功能，而使得其產(chǎn)孢能力降低。從永仁、麗江和昆明3個不同種植園的油橄欖根際土壤中濕篩到的孢子數(shù)量和種類列入表3。本項研究在3個樣地都分別采集了9株油橄欖進(jìn)行研究，從永仁、麗江和昆明分別濕篩得到AMF6種、4種和4種。從永仁的樣品中濕篩得到大果球囊霉(Glomusmacrocarpum)、懸鉤子球囊霉(G.rubiformis)、小果球囊霉(G.micrcarpum)，2種未鑒定到種的球囊霉屬的AMF(分別記為G.sp.1和G.sp.2)，以及1種未鑒定到種的無梗囊霉屬的AMF(A.sp.1);從麗江的樣品中濕篩得到大果球囊霉、縮球囊霉(G.constrictum)、根內(nèi)球囊霉(G.intraradices)和一種未鑒定到種的球囊霉屬的AMF(記為G.sp.3);從昆明的樣品濕篩得到大果球囊霉、縮球囊霉、根內(nèi)球囊霉和一種未鑒定到種的球囊霉屬的AMF(記為G.sp.4)。從表3可以看出，大果球囊霉是3個栽培點共有的優(yōu)勢種，在永仁、麗江和昆明油橄欖栽培點AMF群落中的重要值分別為55.03、62.18和56.20，這一結(jié)果與其他一些研究的結(jié)果類似，即油橄欖對AMF也存在一定程度的選擇性或者說是偏好性。永仁除了大果球囊霉與其他兩個樣地共有外，永仁樣地分離到的另外5種AMF在麗江和昆明都沒有分離到。相對來說，麗江和昆明兩樣地之間種類組成的相似度高一些，除大果球囊霉外，兩地還共有縮球囊霉和根內(nèi)球囊霉兩個種。根據(jù)表3中的數(shù)據(jù)計算不同樣地之間表征AMF群落相似程度的Sorenson’s相對系數(shù)，永仁和麗江之間的Sorenson’s系數(shù)為0.2，麗江和昆明之間的Sorenson’s系數(shù)為0.75，永仁和昆明之間的Sorenson’s系數(shù)為0.2。本研究對3個栽培點的調(diào)查分析得到油橄欖根際土壤中AMF種類較少，并以Glomus為優(yōu)勢屬，這與Calvente等(2004)對西班牙南部地區(qū)Jaén一個主要的油橄欖種植園研究所得的結(jié)果類似，他們采用形態(tài)學(xué)的研究方法，從油橄欖的根際土壤中分離到4種AMF孢子，全部為Glomus真菌，因此認(rèn)為單作的油橄欖園選擇了少數(shù)幾個AMF種類。事實上，農(nóng)地中AMF多樣性較低的現(xiàn)象早已被研究和發(fā)現(xiàn)，尤其是在單作的情況下。

3結(jié)論

(1)在所調(diào)查的永仁、麗江和昆明等3個云南油橄欖的主要引種栽培地點，發(fā)現(xiàn)AMF在油橄欖根系中普遍存在，是油橄欖根系的一個重要組成部分。(2)相同年齡的油橄欖植株，在不同的栽培地點，AMF在根系中的定殖率以及土壤中的AMF孢子密度差異均十分顯著，可以推知立地條件特別是土壤理化性質(zhì)顯著地影響著油橄欖的AM狀況和土壤中AMF孢子的豐富程度。(3)不同栽培區(qū)，油橄欖根際土壤中AMF群落組成的差異較大，表明不同的立地條件下，可能與油橄欖保持共生關(guān)系的土著AMF種類不盡相同;因而在今后的研究中，應(yīng)針對不同的栽培區(qū)域，具體選擇不同的AMF菌株，開展油橄欖的接種試驗研究，并進(jìn)一步應(yīng)用于油橄欖的苗木培育中。

作者：卯吉華寧德魯李榮波景躍波單位：云南省林業(yè)科學(xué)院